液相色譜是一類分離與分析技�(shù),其特點(diǎn)是以液體作為流動(dòng)相,固定相可以有多種形式,如�、薄板和填充床等。在色譜技�(shù)�(fā)展的�(guò)程中.為了區(qū)分各種方�,根�(jù)固定相的形式�(chǎn)生了各自的命名,如紙色譜、薄層色譜和柱液相色��
液相色譜是一類分離與分析技�(shù),其特點(diǎn)是以液體作為流動(dòng)�,固定相可以有多種形�,如�、薄板和填充床等。在色譜技�(shù)�(fā)展的�(guò)程中.為了區(qū)分各種方�,根�(jù)固定相的形式�(chǎn)生了各自的命�,如紙色譜、薄層色譜和柱液相色��
�(jīng)典液相色譜的流動(dòng)相是依靠重力緩慢地流�(guò)色譜�,因此固定相的粒度不可能太小(100μm�150μm左右)。分離后的樣品是被分�(jí)收集后再�(jìn)行分析的,使得經(jīng)典液相色譜不僅分離效率低、分析速度�,而且操作也比較復(fù)�。直�20世紀(jì)60年代.發(fā)展出粒度小于10μm的高效固定相,并使用了高壓輸液泵和自�(dòng)記錄的檢�(cè)�,克服了�(jīng)典液相色譜的缺點(diǎn),發(fā)展成高效液相色譜,也稱為高壓液相色譜�
液相色譜按其分離�(jī)�,可分為四種類型�
吸附色譜�
吸附色譜法的固定相為吸附劑,色譜的分離過(guò)程是在吸附劑表面�(jìn)行的,不�(jìn)入固定相的內(nèi)部。與氣相色譜不同,流�(dòng)�(即溶�)分子也與吸附劑表面發(fā)生吸附作�。在吸附劑表�,樣品分子與流動(dòng)相分子�(jìn)行吸附競(jìng)�(zhēng),因此流�(dòng)相的選擇�(duì)分離效果有很大的影響,一般可采用梯度淋洗法來(lái)提高色譜分離效率�
在聚合物的分析中,吸附色譜一般用�(lái)分離添加劑,如偶氮染�、抗氧化�、表面活性劑�,也可用于石油烴類的組成分析�
分配色譜�
這種色譜的流�(dòng)相和固定相都是液�,樣品分子在兩�(gè)液相之間很快�(dá)到平衡分配,利用各組分在兩相中分配系�(shù)的差異�(jìn)行分�,類似于萃取�(guò)��
一般常用的固定液有β,β'-氧二丙腈(ODPN)、聚乙二�(PEG400�4000)、三甲撐乙二�(TMG)和角�?fù)?SQ)。采用與氣相色譜(GC)同樣的方�,將固定液涂漬在多孔的載體表�,但在使用中固定液易流失。目�,應(yīng)用較多的是鍵合固定相。在這種固體相中,固定液不是涂在載體表面,而是通過(guò)化學(xué)反應(yīng)在純硅膠顆粒表面鍵合上某種有�(jī)基團(tuán)�
例如,利用氯代十八烷基硅烷與硅膠表面的羥�(-OH)之間的反�(yīng)就可以形成一烷基化表�。這種固定液的�(yōu)�(diǎn)是不易被流動(dòng)相剝�。在分配色譜法中,流�(dòng)相可為純?nèi)�?,也可以采用混合溶劑�(jìn)行梯度淋洗,其極性應(yīng)與固定液差別大一�,以避免兩者之間相溶。�??煞譃檎喾峙浜头聪喾峙�?BR> 離子交換色譜
離子交換色譜通常用離子交換樹脂作為固定相。一般是樣品離子與固定相離子�(jìn)行可逆交�,由于各組分離子的交換能力不�,從而達(dá)到色譜的分離�
離子交換色譜法是新發(fā)展起�(lái)的一�(xiàng)�(xiàn)代分析技�(shù),已廣泛用于氨基�、蛋白質(zhì)的分�,也適合于某些無(wú)�(jī)離子(NO3-、SO42-、Cl-等無(wú)�(jī)陰離子和Na+、Ca2+、Mg2+、K+等無(wú)�(jī)�(yáng)離子)的分離和分析,具有十分重要的作用�
凝膠色譜�
目前,凝膠色譜法既適用于水溶液的體系,又適用于有�(jī)溶劑的體�。當(dāng)所用的洗脫劑為水溶液時(shí),稱為凝膠過(guò)濾色�,其在生物界的應(yīng)用比較多;采用有�(jī)溶劑為洗脫劑�(shí),稱為凝膠滲透色�,在高分子領(lǐng)域應(yīng)用較��
上述的四種不同類型的液相色譜.可以依�(jù)樣品性質(zhì)的不�,選擇不同的方法�
液相色譜所用基本概念:保留�、塔板數(shù)、塔板高�、分離度、選擇性等與氣相色譜一�。液相色譜所用基本理論:塔板理論與速率方程也與氣相色譜基本一致,但由于在氣相色譜中以液體代替氣相色譜中氣體作為流�(dòng)�,而液體和氣體的性質(zhì)不相�。此�,液相色譜所用的儀器設(shè)備和操作條件也與氣相色譜不同,所�,液相色譜與氣相色譜有一定的差別�
主要有以下幾方面�
①操作條件及�(yīng)用范圍不�
�(duì)于氣相色�,是加溫操作。僅能分析在操作溫度下能汽化而不分解的物�(zhì),對(duì)高沸�(diǎn)化合�、非揮發(fā)性物�(zhì)、熱不穩(wěn)定化合物、離子型化合物及高聚物的分離、分析較為困�,致使其�(yīng)用受到一定程度的限制,據(jù)�(tǒng)�(jì)只有大約20%的機(jī)物能用氣相色譜分析。而液相色譜是常溫操作,不受樣品揮�(fā)度和熱穩(wěn)定性的限制,它非常適合相對(duì)分子量較大,難汽�,不易揮�(fā)�?qū)崦舾械奈镔|(zhì)、離子型化合物和高聚物的分離分析,大約占有機(jī)物的70%~80%�
?、谝合嗌V能完成難度較高的分離工作
a.氣相色譜的流�(dòng)相載氣是色譜惰性的,基本不參與分配平衡�(guò)�,與樣品分子�(wú)親和作用,樣品分子主要與固定相相互作�。而在液相色譜中流�(dòng)相液體也與固定相�(zhēng)奪樣品分�,為提高選擇性增加了一�(gè)因素。也可選擇不同比例的兩種或兩種以上的液體做流�(dòng)相,增加分離的選擇��
b.液相色譜固定相類型多,如離子交換色譜和排阻色譜等,作為分析時(shí),選擇余地大;而氣相色譜并不可��
c.液相色譜通常在室溫下操作,較低的溫度,一般有利于色譜分離條件的選擇�
?、塾捎谝后w的擴(kuò)散性比氣體的小105�,因此,溶質(zhì)在液相中的傳�(zhì)速率�,柱外效�(yīng)就顯得特別重�;而在氣相色譜�,由色譜柱外區(qū)域引起的�(kuò)張可以忽略不�(jì)�
?、芤合嗌V�,制備樣品簡(jiǎn)單,回收樣品也比較容�,而且回收是定量的,適合于大量制備,但液相色譜尚缺乏通用的檢�(cè)�,一起比較復(fù)�,價(jià)格昂�。在�(shí)際應(yīng)用中,這兩種技�(shù)是相互補(bǔ)充的�
綜上所述,液相色譜具有柱效�,選擇性高,靈敏性高,分析速度�,重�(fù)性好,應(yīng)用范圍廣等優(yōu)�(diǎn),該法已成為�(xiàn)代分析技�(shù)的主要手段之一。目前在化學(xué),化�,醫(yī)藥,生化,環(huán)�,農(nóng)�(yè)等科�(xué)�(lǐng)域獲得廣泛的�(yīng)��
基本原理
高效液相色譜(HighPerformanceLiquidChromatography,HPLC),是在經(jīng)典液相色譜法的基�(chǔ)�,于20世紀(jì)60年代后期引入了氣相色譜理論而迅速發(fā)展起�(lái)�。與�(jīng)典液相色譜法的區(qū)別是填料顆粒小而均�。因?yàn)檩^小的填充顆粒具有高柱效,但會(huì)引起高阻�,需用高壓輸送流�(dòng)相,故又稱高壓液相色��
使用高效液相色譜�(shí),液體待檢測(cè)物被注入色譜�,通過(guò)壓力在固定相中移�(dòng),由于被�(cè)物種不同物質(zhì)與固定相的相互作用不�,不同的物質(zhì)順序離開(kāi)色譜�,通過(guò)檢測(cè)器得到不同的峰信�(hào),通過(guò)分析比對(duì)這些信號(hào)�(lái)判斷待測(cè)物所含有的物�(zhì)。高效液相色譜作為一種重要的分析方法,廣泛地�(yīng)用于化學(xué)和生化分析中。高效液相色譜從原理上與�(jīng)典的液相色譜�(méi)有本�(zhì)的差�,它的特�(diǎn)是采用了高壓輸液泵、高靈敏度檢�(cè)器和高效微粒固定�,適于分析高沸點(diǎn)不易揮發(fā)、分子量�、不同極性的有機(jī)化合��
高效液相色譜儀的構(gòu)�
高效液相色譜系統(tǒng)主要由流�(dòng)相儲(chǔ)液瓶、輸液泵、�(jìn)樣器、色譜柱、檢�(cè)器和記錄儀組成,其整體組成類似于氣相色譜,但是針對(duì)其流�(dòng)相為液體的特�(diǎn)作出很多�(diào)�。高效液相色譜的輸液泵要求輸液量恒定平穩(wěn),�(jìn)樣系�(tǒng)要求�(jìn)樣便�、切換嚴(yán)�。同�(shí),由于液體流�(dòng)相黏度遠(yuǎn)�(yuǎn)高于氣體,為了減低柱�,高效液相色譜的色譜柱一般比較粗,長(zhǎng)度也�(yuǎn)小于氣相色譜��
高效液相色譜的應(yīng)�
高效液相色譜�(yīng)用非常廣�,幾乎遍及定量定性分析的各�(gè)�(lǐng)域�
(1)分離混合�
高效液相色譜法只要求樣品能制成溶�,不受樣品揮�(fā)性的限制,流�(dòng)相可選擇的范圍寬,固定相的種類繁多,因而可以分離熱不穩(wěn)定和非揮�(fā)性的、離解的和非離解的以及各種分子量范圍的物�(zhì)�
通過(guò)與試樣預(yù)處理技�(shù)相配合,高效液相色譜法所�(dá)到的高分辨率和高靈敏�,可分離并同�(shí)�(cè)定性質(zhì)上十分相近的物質(zhì),能夠分離復(fù)雜混合物中的微量成分。并且隨著固定相的發(fā)�,還可在充分保持生化物質(zhì)活性的條件下完成對(duì)其的分離�
(2)生化分析
由于高效液相色譜法具有高分辨�、高靈敏�、速度�、色譜柱可反�(fù)利用,流出組分易收集等優(yōu)�(diǎn),因而被廣泛�(yīng)用到生物化學(xué)、食品分析、醫(yī)藥研�、環(huán)境分析、無(wú)�(jī)分析等各種領(lǐng)�,并已成為解決生化分析問(wèn)題最有前途的方法�
(3)儀器聯(lián)�
高效液相色譜儀與結(jié)�(gòu)儀器的�(lián)用是一�(gè)重要的發(fā)展方�。高效液相色譜一�(zhì)譜聯(lián)用技�(shù)受到普遍重視,如分析氨基甲酸酯農(nóng)藥和多核芳烴等:高效液相色譜一紅外光譜�(lián)用也�(fā)展很快,如在�(huán)境污染分析測(cè)定水中的烴類等.使環(huán)境污染分析得到新的發(fā)��
維庫(kù)電子�,電子知�(shí),一查百��
已收錄詞�153979�(gè)