1852年，比爾(Beer)參考了布給爾(Bouguer)1729年和朗伯(Lambert)在1760年所發(fā)表的文章，提出了分光光度的基本定律，即液層厚度相等時(shí)，顏色的強(qiáng)度與呈色溶液的濃度成比例，從而奠定了分光光度法的理論基礎(chǔ)，這就是的朗伯比爾定律。1854年，杜包斯克(Duboscq)和奈斯勒(Nessler)等人將此理論應(yīng)用于定量分析化學(xué)領(lǐng)域，并且設(shè)計(jì)了臺(tái)比色計(jì)。到1918年，美國(guó)國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)局制成了臺(tái)紫外可見(jiàn)分光光度計(jì)。此后，紫外可見(jiàn)分光光度計(jì)經(jīng)不斷改進(jìn)，又出現(xiàn)自動(dòng)記錄、自動(dòng)打印、數(shù)字顯示、微機(jī)控制等各種類型的儀器，使光度法的靈敏度和準(zhǔn)確度也不斷提高，其應(yīng)用范圍也不斷擴(kuò)大。紫外可見(jiàn)分光光度法從問(wèn)世以來(lái)，在應(yīng)用方面有了很大的發(fā)展，尤其是在相關(guān)學(xué)科發(fā)展的基礎(chǔ)上，促使分光光度計(jì)儀器的不斷創(chuàng)新，功能更加，使得光度法的應(yīng)用更拓寬了范圍。紫外分光光度計(jì)，就是根據(jù)物質(zhì)的吸收光譜研究物質(zhì)的成分、結(jié)構(gòu)和物質(zhì)間相互作用的有效手段。例如由上海元析儀器設(shè)備公司引進(jìn)的紫外分光光度計(jì)物質(zhì)的吸收光譜就是物質(zhì)中的分子和原子吸收了入射光中的某些特定波長(zhǎng)的光能量，相應(yīng)地發(fā)生了分子振動(dòng)能級(jí)躍遷和電子能級(jí)躍遷的結(jié)果。由于各種物質(zhì)具有各自不同的分子、原子和不同的分子空間結(jié)構(gòu)，其吸收光能量的情況也就不會(huì)相同，因此，每種物質(zhì)就有其特有的、固定的吸收光譜曲線，可根據(jù)吸收光譜上的某些特征波長(zhǎng)處的吸光度的高低判別或測(cè)定該物質(zhì)的含量。

    UV-9000型紫外可見(jiàn)分光光度計(jì)

    技術(shù)指標(biāo)

    波長(zhǎng)范圍：190-900nm

    光譜帶寬：0.1/0.2/0.5/1.0/2.0/4.0nm六檔可選

    波長(zhǎng)準(zhǔn)確度：±0.1nm（D2656.1nm），±0.3nm全區(qū)域

    波長(zhǎng)重復(fù)性：≤0.1nm

    雜散光：≤0.01%T

    光度準(zhǔn)確度：±0.2%T

    光度重復(fù)性：0.1%T

    穩(wěn)定性：0.0004A/h（500nm處）

    基線平直度：±0.001A

    數(shù)據(jù)輸出：USB接口

    打印輸出：并行口

    光度顯示范圍：0-200%T、-4-4A、0-9999C（0-9999F）

    顯示系統(tǒng)：320*240位點(diǎn)陣高亮背光大屏幕LCD液晶顯示器

    軟件：標(biāo)配

    燈源：進(jìn)口氘燈、鎢燈

    接收器：進(jìn)口硅光二極管

    外形尺寸：460*380*220mm

    重量：20kg

    儀器特點(diǎn)

    1、320*240位點(diǎn)陣高質(zhì)量大屏幕液晶顯示器，顯示清晰，信息完備，充分考慮人性化設(shè)計(jì)

    2、強(qiáng)大的數(shù)據(jù)處理功能，使實(shí)驗(yàn)結(jié)果能得到充分的應(yīng)用，使用戶編輯更為簡(jiǎn)單快捷

    3、主要元件采用進(jìn)口配置，使精度更高、速度更快、可靠性更強(qiáng)、兼容性更廣、自動(dòng)化程度更高

    4、豐富的應(yīng)用功能，使用戶隨心所欲，應(yīng)用更靈活、開(kāi)放，使分光光度計(jì)的應(yīng)用領(lǐng)域得到了極大的拓展

    5、高自動(dòng)化程度，使維護(hù)方便、操作簡(jiǎn)便、效率更高

    大屏幕液晶LCD主機(jī)顯示功能

    光度測(cè)量：選定波長(zhǎng)下吸光度、透過(guò)率、濃度的測(cè)試

    定量測(cè)量：標(biāo)準(zhǔn)曲線法、系數(shù)法、單波長(zhǎng)法、雙波長(zhǎng)法、多波長(zhǎng)法

    光譜掃描：多樣品進(jìn)行全波段掃描，找出大吸收峰值

    動(dòng)力學(xué)測(cè)試：選定波長(zhǎng)下測(cè)試樣品濃度隨時(shí)間的變化趨勢(shì)

    多波長(zhǎng)測(cè)試：自由選定多個(gè)波長(zhǎng)，自動(dòng)測(cè)出樣品在多個(gè)波長(zhǎng)下的吸光度和透過(guò)率值

    DNA/蛋白質(zhì)測(cè)試：測(cè)試DAN/蛋白質(zhì)的濃度和比率

    自動(dòng)功能：波長(zhǎng)誤差的自動(dòng)修復(fù)、濾光片切換的自動(dòng)定位、氘燈和鎢燈的自動(dòng)切換

    其他功能：光譜導(dǎo)數(shù)、光譜平滑、數(shù)據(jù)導(dǎo)出、燈源自動(dòng)控制、支持自動(dòng)樣品池架及其它附件、配有數(shù)據(jù)口可實(shí)現(xiàn)聯(lián)機(jī)操作、數(shù)據(jù)存儲(chǔ)和調(diào)用、斷電保持和系統(tǒng)應(yīng)用功能豐富的掃描軟件功能：光度分析、定量分析、光譜分析、動(dòng)力學(xué)分析、多波長(zhǎng)測(cè)試、DNA/蛋白質(zhì)測(cè)試、系統(tǒng)應(yīng)用。[1]

    物質(zhì)的吸收光譜本質(zhì)上就是物質(zhì)中的分子和原子吸收了入射光中的某些特定波長(zhǎng)的光能量，相應(yīng)地發(fā)生了分子振動(dòng)能級(jí)躍遷和電子能級(jí)躍遷的結(jié)果。由于各種物質(zhì)具有各自不同的分子、原子和不同的分子空間結(jié)構(gòu)，其吸收光能量的情況也就不會(huì)相同。因此，每種物質(zhì)就有其特有的、固定的吸收光譜曲線，可根據(jù)吸收光譜上的某些特征波長(zhǎng)處的吸光度的高低判別或測(cè)定該物質(zhì)的含量，這就是分光光度定性和定量分析的基礎(chǔ)。分光光度分析就是根據(jù)物質(zhì)的吸收光譜研究物質(zhì)的成分、結(jié)構(gòu)和物質(zhì)間相互作用的有效手段。

    又因?yàn)樵S多物質(zhì)在紫外-可見(jiàn)光區(qū)有特征吸收峰，所以可用紫外分光光度法對(duì)這些物質(zhì)分別進(jìn)行測(cè)定（定量分析和定性分析）。紫外分光光度法使用基于朗伯-比耳定律。

    朗伯-比耳定律(Lambert－Beer)是光吸收的基本定律，俗稱光吸收定律，是分光光度法定量分析的依據(jù)和基礎(chǔ)。當(dāng)入射光波長(zhǎng)一定時(shí)，溶液的吸光度A是吸光物質(zhì)的濃度C及吸收介質(zhì)厚度l(吸收光程)的函數(shù)。

    首先確定實(shí)驗(yàn)條件，并在此條件下測(cè)得標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的吸收峰以及其對(duì)應(yīng)波長(zhǎng)值（同時(shí)可獲得該物質(zhì)的大吸收波長(zhǎng)）；再在選定的波長(zhǎng)范圍內(nèi)（或大波長(zhǎng)值處），分別以（不同濃度）標(biāo)準(zhǔn)溶液的吸光度和溶液濃度為橫、縱坐標(biāo)繪出化合物溶液的標(biāo)準(zhǔn)曲線得到其所對(duì)應(yīng)的數(shù)學(xué)方程；接著在相同實(shí)驗(yàn)條件下配制待測(cè)溶液，測(cè)得待測(cè)溶液的吸光度，后用已獲得的標(biāo)準(zhǔn)曲線方程求出待測(cè)溶液中所需測(cè)定的化合物的含量。

    凡具有芳香環(huán)或共軛雙鍵結(jié)構(gòu)的有機(jī)化合物，根據(jù)在特定吸收波長(zhǎng)處所測(cè)得的吸收度，可用于藥品的鑒別、純度檢查及含量測(cè)定。

    紫外分光光度計(jì)的校正方法：分光光度法的重要的一個(gè)物理化學(xué)量是吸光度。為了獲得準(zhǔn)確的研究結(jié)果，準(zhǔn)確測(cè)得樣品溶液的吸光度是非常重要的。一般，分析結(jié)果的不可靠性與偶然誤差和系統(tǒng)誤差有關(guān)。偶然誤差影響測(cè)量的精密度，可通過(guò)足夠數(shù)量測(cè)量的統(tǒng)計(jì)處理來(lái)減少;系統(tǒng)誤差影響測(cè)量結(jié)果的準(zhǔn)確度，可在大體相同實(shí)驗(yàn)條件下，用比較一種物質(zhì)的準(zhǔn)確測(cè)量結(jié)果，使系統(tǒng)誤差統(tǒng)一起來(lái)。而分光光度計(jì)的系統(tǒng)誤差(波長(zhǎng)校正、分光光度計(jì)的慢散光、放大器的線性響應(yīng)、暗電流和比色皿的光程)和操作誤差(溫度改變、儀器讀數(shù)、操作者的改變、使用物質(zhì)的純度、稱量和濃度、pH)對(duì)測(cè)量吸光度的影響是可以檢查和校正的。關(guān)于操作誤差，多數(shù)情況下，通過(guò)嚴(yán)格按操作程序測(cè)量、儀器調(diào)零、準(zhǔn)確稱量等來(lái)控制或減少這種誤差的產(chǎn)生。關(guān)于儀器的系統(tǒng)誤差，可通過(guò)對(duì)分光光度計(jì)的定期校正來(lái)克服，若所需準(zhǔn)確度很高的測(cè)量，則必須天天校正。

    校正內(nèi)容：

    1、波長(zhǎng)的準(zhǔn)確度試驗(yàn)以儀器顯示的波長(zhǎng)數(shù)值與單色光的實(shí)際波長(zhǎng)值之間誤差表示，應(yīng)在±1.0nm范圍內(nèi)�？捎脙x器中氘燈的486.02nm與656.10nm譜線進(jìn)行校正；

    2、吸收度的準(zhǔn)確度試驗(yàn)；

    3、雜散光的試驗(yàn)；

    4、波長(zhǎng)重現(xiàn)性試驗(yàn)；

    5、分辨率試驗(yàn)。

    吸光度的校正方法：校正吸光度常用一很純物質(zhì)一定濃度的溶液為標(biāo)準(zhǔn)，且此溶液的吸光度系數(shù)經(jīng)不同實(shí)驗(yàn)室核對(duì)，為了使標(biāo)準(zhǔn)液吸光度不受測(cè)定波長(zhǎng)的微移動(dòng)而有改變，常選擇具有較平滑吸收高峰的物質(zhì)，同時(shí)要求溶液穩(wěn)定，且在相當(dāng)?shù)牟ㄩL(zhǎng)范圍內(nèi)吸收度的改變符合Beer-Lambert定律，常用硫酸銅、硫酸銨鈷和硝酸鈉或鉀的溶液。鉻酸鉀溶液是常用的標(biāo)準(zhǔn)溶液，此溶液在紫外區(qū)和可見(jiàn)區(qū)均適用。

    波長(zhǎng)或波數(shù)的校正方法：可用具有窄吸收帶的溶液，濾光片或蒸氣來(lái)校正所需要的光波范圍。如果要求很高的精密度時(shí)，可用放電燈泡發(fā)射的射線來(lái)校正。有的光譜儀其上已裝有一個(gè)為校正用的燈。苯的蒸氣對(duì)校正一定范圍的波長(zhǎng)亦很有用，可用一小滴苯放于一厘米厚的吸收杯中，測(cè)其吸收波長(zhǎng)，在遠(yuǎn)紫外區(qū)可用氧氣的吸收帶進(jìn)行校正。用各種稀土金屬的濾光片，可以很快地校正波長(zhǎng)，但準(zhǔn)確度不如上述方法高。常用含有鈥和釹、鐠離子的濾光片。

    雜散光的校正方法：小量的雜散光往往會(huì)引起較大的測(cè)量誤差，它的校正可用一個(gè)能完全吸收某一波長(zhǎng)單色光，且在其他波長(zhǎng)吸收很弱的溶液。從這個(gè)溶液所表現(xiàn)的透光情況可推測(cè)雜散光的近似值。由雜散光帶來(lái)的偽吸收帶，亦可用Beer-Lambert定律來(lái)檢查，但用此定律檢查偽吸收帶誤差較大。由切斷范圍之外所表現(xiàn)的透射比可得出近似的雜散光百分?jǐn)?shù)。若所含雜散光大于0.1%，應(yīng)設(shè)法減低，或?qū)�測(cè)得的吸收光度進(jìn)行校正。由雜散光引起的誤差與雜散輻射成正比，因此校正值很容易從化合物的近于正確的曲線計(jì)算而得。此外，還可用一個(gè)適當(dāng)?shù)臑V光片，該濾光片在測(cè)定波長(zhǎng)范圍內(nèi)完全透光，但吸收此范圍外的光波，由此來(lái)消除雜散光。

    1檢定物質(zhì)

    根據(jù)吸收光譜圖上的一些特征吸收，特別是大吸收波長(zhǎng)λmax和摩爾吸收系數(shù)ε是檢定物質(zhì)的常用物理參數(shù)。這在藥物分析上就有著很廣泛的應(yīng)用。在國(guó)內(nèi)外的藥典中，已將眾多的藥物紫外吸收光譜的大吸收波長(zhǎng)和吸收系數(shù)載入其中，為藥物分析提供了很好的手段。

    2與標(biāo)準(zhǔn)物及標(biāo)準(zhǔn)圖譜對(duì)照

    將分析樣品和標(biāo)準(zhǔn)樣品以相同濃度配制在同一溶劑中，在同一條件下分別測(cè)定紫外可見(jiàn)吸收光譜。若兩者是同一物質(zhì)，則兩者的光譜圖應(yīng)完全一致。如果沒(méi)有標(biāo)樣，也可以和現(xiàn)成的標(biāo)準(zhǔn)譜圖對(duì)照進(jìn)行比較。這種方法要求儀器準(zhǔn)確，精密度高，且測(cè)定條件要相同。

    3比較大吸收波長(zhǎng)吸收系數(shù)的一致性

    4純度檢驗(yàn)

    5推測(cè)化合物的分子結(jié)構(gòu)

    6氫鍵強(qiáng)度的測(cè)定

    實(shí)驗(yàn)證明，不同的極性溶劑產(chǎn)生氫鍵的強(qiáng)度也不同，這可以利用紫外光譜來(lái)判斷化合物在不同溶劑中氫鍵強(qiáng)度，以確定選擇哪一種溶劑。

    7絡(luò)合物組成及穩(wěn)定常數(shù)的測(cè)定

    8反應(yīng)動(dòng)力學(xué)研究

    9在有機(jī)分析中的應(yīng)用

    有機(jī)分析是一門研究有機(jī)化合物的分離、鑒別及組成結(jié)構(gòu)測(cè)定的科學(xué)，它是在有機(jī)化學(xué)和分析化學(xué)的基礎(chǔ)上發(fā)展起來(lái)的綜合性學(xué)科。

    日常維護(hù)一、溫度和濕度是影響儀器性能的重要因素。他們可以引起機(jī)械部件的銹蝕，使金屬鏡面的光潔度下降，引起儀器機(jī)械部分的誤差或性能下降；造成光學(xué)部件如光柵、反射鏡、聚焦鏡等的鋁膜銹蝕，產(chǎn)生光能不足、雜散光、噪聲等，甚至儀器停止工作，從而影響儀器壽命。維護(hù)保養(yǎng)時(shí)應(yīng)定期加以校正。應(yīng)具備四季恒濕的儀器室，配置恒溫設(shè)備，特別是地處南方地區(qū)的實(shí)驗(yàn)室。二、環(huán)境中的塵埃和腐蝕性氣體亦可以影響機(jī)械系統(tǒng)的靈活性、降低各種限位開(kāi)關(guān)、按鍵、光電偶合器的可靠性，也是造成必須學(xué)部件鋁膜銹蝕的原因。因此必須定期清潔，保障環(huán)境和儀器室內(nèi)衛(wèi)生條件，防塵。三、儀器使用一定周期后，內(nèi)部會(huì)積累一定量的塵埃，好由維修工程師或在工程師指導(dǎo)下定期開(kāi)啟儀器外罩對(duì)內(nèi)部進(jìn)行除塵工作，同時(shí)將各發(fā)熱元件的散熱器重新緊固，對(duì)光學(xué)盒的密封窗口進(jìn)行清潔，必要時(shí)對(duì)光路進(jìn)行校準(zhǔn)，對(duì)機(jī)械部分進(jìn)行清潔和必要的潤(rùn)滑，后，恢復(fù)原狀，再進(jìn)行一些必要的檢測(cè)、調(diào)校與記錄。