生化分析儀又常被稱(chēng)為生化儀,是采用光電比色原理�(lái)�(cè)量體液中某種特定化學(xué)成分的儀�。由于其�(cè)量速度�、準(zhǔn)確性高、消耗試劑量�,現(xiàn)已在各級(jí)�(yī)�、防疫站、計(jì)劃生育服�(wù)站得到廣泛使�。配合使用可大大提高常規(guī)生化檢驗(yàn)的效率及收益�
自動(dòng)生化分析儀是將生化分析中的取樣、加試劑、去干擾�、混�、保�、比色、結(jié)果計(jì)�、書(shū)�(xiě)�(bào)告和清理等步驟的部分或全部由模仿手工操作的儀器來(lái)完成。它可�(jìn)行定�(shí)�、連續(xù)�(jiān)�(cè)法等各種反應(yīng)�(lèi)型的分析�(cè)�。除了一般的生化�(xiàng)目測(cè)定外,有的還可�(jìn)行激素、免疫球蛋白、血藥濃度等特殊化合物的�(cè)定以及酶免疫、熒光免疫等分析方法的應(yīng)�。它具有快�、簡(jiǎn)�、靈�、準(zhǔn)確、標(biāo)�(zhǔn)�、微量等特點(diǎn)�
分類(lèi) 自動(dòng)生化分析儀有多種分�(lèi)方法,常用的是按其反�(yīng)裝置的結(jié)�(gòu)�(jìn)行分�(lèi)。按此法可將自動(dòng)生化分析儀分為流動(dòng)式和分立式兩大類(lèi)�
所謂流�(dòng)式自�(dòng)生化分析儀是指�(cè)定項(xiàng)目相同的各待�(cè)樣品與試劑混合后的化�(xué)反應(yīng)在同一管道流動(dòng)的過(guò)程中完成。這是代自�(dòng)生化分析儀。過(guò)去說(shuō)得多少通道的生化分析儀指的就是這一�(lèi)。存在較�(yán)重的交叉污染,結(jié)果不太準(zhǔn)�,現(xiàn)已淘汰�
分立式自�(dòng)生化分析儀與流�(dòng)式的主要差別是每�(gè)待測(cè)樣品與試劑混合間的化�(xué)反應(yīng)都是分別在各自的反應(yīng)皿中完成�,不易出�(xiàn)較差污染,結(jié)果可靠。但不可隨意使用
�?yàn)樽詣?dòng)生化分析儀是模仿手工操作的�(guò)�,所以無(wú)論哪一�(lèi)的自�(dòng)生化分析儀,其�(jié)�(gòu)組成均與手工操作的一些器械設(shè)備相�,一般可有以下幾�(gè)部分組成�
1、樣品器:放置待�(cè)樣本、標(biāo)�(zhǔn)品、質(zhì)控液、液和對(duì)照液��
2、取樣裝置:包括稀釋器、取樣探針和輸送樣品和試劑的管道等�
3、反�(yīng)池或反應(yīng)管道:一般起比色皿(管)的作��
4、保溫器:為化學(xué)反應(yīng)提供恒定的溫��
5、檢�(cè)器:如比色計(jì)、分光光度計(jì)、熒光分光光度計(jì)、火焰光度計(jì)、電化學(xué)�(cè)定儀�。不同儀器配置不同�
6、微處理器:是分析儀的電腦部�,又叫程序控制器??刂苾x器所有的�(dòng)作和功能,使用者可通過(guò)鍵盤(pán)與儀器“對(duì)話�,同�(shí)電腦還能接受從各部件反饋�(lái)的信�(hào),并作出相應(yīng)的反�(yīng),對(duì)異常情況�(fā)出一定的指示信號(hào)。分析軟件和分析�(jié)果一般貯存在磁盤(pán)�,可共查�(xún)�
7、打印機(jī):可繪制反應(yīng)�(dòng)�(tài)曲線和打印檢�(yàn)�(bào)告單��
8、功能監(jiān)�(cè)器:顯示屏就是其中一部分,可查看反應(yīng)狀�(tài)、人�(jī)“對(duì)話”的情況、當(dāng)前儀器工作狀�(tài)、分析結(jié)果等�
這種分析儀的特�(diǎn)是通過(guò)比例定量泵擠壓彈性樣品管、空氣管和試劑管(通稱(chēng)“泵管”),將樣品依次連續(xù)地吸入并沿樣品管輸送,另一方面由空氣管吸入的氣泡將由同樣原理吸入并在試劑管道中連續(xù)流動(dòng)的試劑分成均勻的節(jié)�,樣品流和試劑流在連續(xù)向前流動(dòng)的過(guò)程中相遇、混�、透吸(必要時(shí))、保�、反�(yīng)及被�(cè)定。整�(gè)分析�(guò)程是液流在管道中連續(xù)流動(dòng)的過(guò)程中完成��
非分段系�(tǒng)是靠試劑或緩沖液�(lái)間隔每�(gè)樣品的反�(yīng)�,這樣,在管道中連續(xù)流動(dòng)的液體不被分段。非分段系統(tǒng)可再分為流動(dòng)注入系統(tǒng)和間隙系�(tǒng)�
1、流�(dòng)注入系統(tǒng):該系統(tǒng)的組成與空氣分段系統(tǒng)相似,但某些�(jié)�(gòu)和工作原理有所不同,空氣分段系�(tǒng)是利用氣泡分段來(lái)防止管道中各反應(yīng)液在流動(dòng)�(guò)程中的交叉污�,而流�(dòng)注入系統(tǒng)則是通過(guò)將樣品依次注入連續(xù)流動(dòng)的試劑流管道中來(lái)�(dá)到防止交叉污染的目的的�
2、間隙系�(tǒng):該系統(tǒng)的結(jié)�(gòu)、組成和工作原理與流�(dòng)注入系統(tǒng)相似,但其特�(diǎn)是每一次�(jìn)樣都必須在前一樣品的分析過(guò)程結(jié)束后(包括管道的清洗)才能開(kāi)�,而不能連續(xù)地依次�(jìn)樣,每次�(jìn)樣間有一�(shí)間間�,故有人�(chēng)為不連續(xù)流動(dòng)式分析儀�
分立式為代自�(dòng)生化分析儀,它與流�(dòng)式的主要差別是每�(gè)待測(cè)樣品與試劑混合間的化�(xué)反應(yīng)都是分別在各自的反應(yīng)皿中完成的�
�(chēng)為代自動(dòng)生化分析儀的離心式自動(dòng)生化分析儀,也�(yīng)屬于分立式。因?yàn)樵陔x心式分析儀�,每�(gè)待測(cè)樣品都是在離心力作用�,在各自的反�(yīng)槽內(nèi)與試劑混�,并完成化學(xué)反應(yīng),繼而被�(cè)定的。離心式分析儀屬于“同步分析�,在離心力的作用�,各待測(cè)樣品幾乎同時(shí)與試劑混�、反�(yīng)并被�(cè)定后打出�(bào)�;而其它分析儀是“順序分析�,即各待�(cè)樣品依次與試劑混合、反�(yīng)先后被測(cè)��
袋式自動(dòng)生化分析儀也應(yīng)屬于分立式,它是用試劑袋代替反應(yīng)管和比色�,測(cè)定時(shí)每�(gè)待測(cè)樣品在各自的試劑袋內(nèi)�(jìn)行反�(yīng)并被檢測(cè)。還有一種稱(chēng)為“干式自�(dòng)生化分析儀”也屬于分立式。它的主要特�(diǎn)是采用固相化�(xué)技�(shù),即將試劑固相于膠片�?yàn)V紙小片等載體�。測(cè)定時(shí)使一定量的待�(cè)樣品分布于一�?jiān)嚰埰�?,一定時(shí)間后用反射光度計(jì)�(cè)��
分立式自�(dòng)生化分析儀,是目前各實(shí)�(yàn)室普遍使用的自動(dòng)生化分析儀,一般都可以任意選擇�(cè)定項(xiàng)�,故�(chēng)為任選式自動(dòng)生化分析儀。下面將重點(diǎn)介紹任選式自�(dòng)生化分析儀�
1、樣品轉(zhuǎn)�(pán):可放置小型樣品杯數(shù)十只。有的分析儀可直接用盛樣本的試管,有的還附有條形碼閱讀裝置,能�(shí)別樣本試管上的條形碼信息,不需給樣本編�(hào),也不必輸入病人資料即可打印出該病人的化�(yàn)�(bào)��
2、試劑室(�(cāng)):不同的分析儀試劑室可容納的試劑盒�(shù)量不�,一般可容納20多種試劑。有的試劑室?guī)в欣洳匮b置,帶有條形碼識(shí)別裝置的試劑室試劑可以任意放置試劑盒位置�
3、取樣裝置:有的分析儀取樣本和取試劑公用同一采樣針,由內(nèi)部的分流閥控制取樣本和取試劑;有的儀器有兩套取樣裝置,分別取樣本和取試劑。采樣針前端有液�?zhèn)鞲衅鞣乐箍瘴虿蓸俞樛獗谝后w掛淋,采樣臂中有�(yù)溫裝�。如果采用多試劑分析方法,將占用試劑室中試劑盒位�,會(huì)減少�(cè)定項(xiàng)目�
1、光源:大多�(shù)分析儀使用鹵素鎢絲燈,工作波長(zhǎng)325�800nm。有的分析儀使用氙燈,工作波�(zhǎng)285�750nm�
2、比色杯:有分立式比色杯、分立式�(zhuǎn)�(pán)式比色杯、離心式比色�(pán)、流�(dòng)�。干式生化儀不需要比色杯,袋式生化儀由試劑袋�(jīng)擠壓自動(dòng)形成比色�。比色杯光徑6-7mm,少�(shù)�10mm�
比色杯中的反�(yīng)液需要恒�,有37��30��25℃三檔可選擇,有的固定為37�。多�(shù)用吹入恒溫空氣的方式,也有用恒溫水浴或半�(dǎo)體溫控裝置的�
為了保證比色杯中反應(yīng)液有±0.1℃的�,分析儀的環(huán)境溫度必需保持18�30�,室溫波�(dòng)不宜2��
3、單色器:(1)干涉濾光片�2)光�
4、檢�(cè)器:�1)光電倍增�,已很少用。(2)列陣固�(tài)光敏二極��
自動(dòng)生化分析儀中有很多供水管道與電磁閥。只讀存儲(chǔ)器中軟件參數(shù)控制電磁閥與輸液泵供給各�(gè)部件的沖洗與吸液,后排出�(jī)�。隨�(jī)存儲(chǔ)器內(nèi)的分析參�(shù)控制電磁閥與注射器的步�(jìn)電機(jī),供�(yīng)樣本、試劑和稀釋用水。有的生化儀還能自動(dòng)沖洗比色杯供反復(fù)使用�
每�(gè)�(xiàng)目的檢測(cè)�(jié)果暫�(shí)�(chǔ)存在隨機(jī)存儲(chǔ)器中,待某�(gè)樣本所需的項(xiàng)目全部檢�(cè)完畢,由微機(jī)匯總打印出綜合報(bào)告單。微�(jī)的存�(chǔ)器中可以存儲(chǔ)相當(dāng)�(shù)量的病人�(shù)�(jù)與逐日的室�(nèi)�(zhì)�?cái)?shù)�(jù),隨�(shí)可以按指令調(diào)�,在熒光屏上顯示或打�,也可存�(chǔ)在軟�(pán)中長(zhǎng)期保存,隨時(shí)�(diào)閱�
每份樣品可以任選試劑室內(nèi)�(yù)置試劑盒的一�(xiàng)或全部項(xiàng)目的檢測(cè)。微�(jī)按輸入的指令,安排項(xiàng)目檢�(cè)次序,一般先做孵育時(shí)間長(zhǎng)的終�(diǎn)法,后做�(jiān)�(cè)�(shí)間短的速率�,以便恒速打印綜合報(bào)告單。當(dāng)指定樣本�(jìn)入待�(cè)位置�(shí),微�(jī)指令試劑盒�(jìn)入試劑取樣位置,按所�(cè)�(xiàng)目的參數(shù)由加樣系�(tǒng)定量取樣,同�(shí)比色杯按微機(jī)的指令到�(dá)指定位置加樣。生化儀的分析速度與儀器加樣周期的�(shí)間有�(guān)。加樣周期的�(shí)間越短分析儀的速度越快。雙試劑法占用兩�(gè)加樣周期,分析速度減半�
1、試�(yàn)代號(hào)
2、試�(yàn)名稱(chēng)
3、試�(yàn)方法
4、試�(yàn)�(lèi)�
5、溫�
6、波�(zhǎng):可選擇主波�(zhǎng)和次波長(zhǎng)�
7、反�(yīng)�(lèi)�
8、終�(diǎn)法零�(diǎn)讀�(shù)
9、樣本量與稀釋水�
10、試劑量與稀釋水�
11、樣�
12、孵育時(shí)�
13、延遲時(shí)�
14、連續(xù)�(jiān)�(cè)�(shí)�
15、標(biāo)�(zhǔn)液數(shù)�
16、標(biāo)�(zhǔn)液濃�
17、重�(fù)校標(biāo)次數(shù)
18、計(jì)算因子(F值)
19、計(jì)量單�
20、小�(shù)�(diǎn)位數(shù)
21、底物耗盡
22、線性度
23、試劑吸光度上限與下�
24、線性范�
25、參考范�
26、等等等�
(一)儀器廠家提供的�(cè)定項(xiàng)�
1、儀器公司自己生�(chǎn)常用�(xiàng)目試劑盒、定�(biāo)液(定值血清型�(biāo)�(zhǔn)液)與定值質(zhì)控血清,提供30種左右常用項(xiàng)目的分析參數(shù),供用戶(hù)直接使用。另外還有數(shù)十�(gè)�(xiàng)目參�(shù)�,由用戶(hù)自己�(kāi)�(fā)新項(xiàng)��
2、有的儀器公司自己不提供試劑�,但有合作的試劑公司,由合作試劑公司提供分析參數(shù)。因�,在�(gòu)�(mǎi)儀器時(shí)必須�(gòu)�(mǎi)一定數(shù)量指定試劑公司的試劑盒(包括定標(biāo)液與定值質(zhì)控血清)�
3、小型儀器公司既不生�(chǎn)試劑�,也�(méi)有合作試劑公司,分析參數(shù)表是空的,需要用�(hù)自己�(shè)�(jì)分析參數(shù),因此難度很大。不�(guò)�(guó)�(nèi)代理商一般提供他們的�(shè)�(jì)參數(shù),往往�(gè)別參�(shù)不恰�(dāng),用�(hù)自己�(yīng)逐條核實(shí)�
(二)好使用廠家的原裝參�(shù)
1、原裝分析參�(shù)不應(yīng)修改,僅�(jì)量單位要選用我國(guó)法定單位。用原公司指定的試劑盒、定�(biāo)液與定值質(zhì)控血清作室內(nèi)�(zhì)量控�,除非分析儀�(méi)有調(diào)試好或有故障,一般能一次通過(guò)�
2、不同公司的定標(biāo)液在定值時(shí)所用原始標(biāo)�(zhǔn)的來(lái)源不�,其定值可以稍有差�。方法學(xué)相同的試劑盒配方也有差異,所以其它公司的定標(biāo)液或用水劑標(biāo)�(zhǔn)液作儀器定�(biāo),使用非指定試劑盒作�(zhì)控,�(cè)得的�(shù)值與�(zhì)控血清的的預(yù)�(jì)值會(huì)有差�,這種情況不表示原裝分析參�(shù)不合��
3、國(guó)�(chǎn)試劑盒的�(chǎn)量已大有提高,可選擇方法�(xué)相同的國(guó)�(chǎn)試劑盒與原公司指定試劑盒作并行檢�(cè),實(shí)�(yàn)樣品�(yīng)包括低值和高�,結(jié)果作相關(guān)分析。符合要求的可以使用。少�(shù)�(xiàng)目的方法�(xué)�(méi)有符合要求的�(guó)�(chǎn)試劑�,只有另行安排該�(xiàng)目的�(guó)�(chǎn)試劑分析參數(shù)。但原參�(shù)要保留或備份,等待合格的�(guó)�(chǎn)試劑盒出�(xiàn)�
4、不論用原公司或�(guó)�(chǎn)試劑�,原分析參數(shù)不應(yīng)隨意修改,尤其是主要參數(shù);如血清試劑比(包括稀釋水量)、孵育時(shí)�、延遲時(shí)間、檢�(cè)�(shí)�,因?yàn)檫@些參�(shù)一旦改�,線性范圍和各種限額參數(shù)都將�(fā)生改�,嚴(yán)重影響測(cè)定結(jié)果的�(zhǔn)確��
5、雙試劑兩步法的方法�(xué)有很多優(yōu)�(diǎn),如果分析儀為雙試劑�,好用雙試劑兩步��
6、底物耗盡參數(shù)不能刪去,否則高濃度�(jié)果出�(xiàn)低�;線性范圍如果刪�,高濃度�(jié)果也�(huì)偏低;試劑吸光度上下限如被刪去,分析儀將接受變�(zhì)試劑�
(三)自己設(shè)�(jì)分析參數(shù)的原�
如果儀器公司不提供分析參數(shù)或測(cè)定項(xiàng)目的方法�(xué)不同,可以自己設(shè)置分析參�(shù)。主要設(shè)�(jì)以下幾�(gè)參數(shù)�
1、樣本試劑比�� 6、計(jì)算因��
2、孵育時(shí)�� 7、底物耗盡限額�
3、延遲時(shí)�� 8、線性度�
4、監(jiān)�(cè)�(shí)�� 9、線性范圍�
5、試劑吸光度上下��
以上這些參數(shù)試劑盒說(shuō)明書(shū)一般都�(huì)提供,可按此填入分析參數(shù)表,定標(biāo)后即可�(jìn)行日常工�,有些參�(shù)在以后的工作中逐步修正�
一、生化儀雙波�(zhǎng)�(cè)定中輔助波長(zhǎng)的選擇:
雙波�(zhǎng)的應(yīng)用是為了消除樣品中對(duì)�(cè)定有干擾的物�(zhì)的影�,而實(shí)際應(yīng)用中選擇輔助波長(zhǎng)主要用于消除脂血、溶血、黃疸的干擾。脂血樣品中的脂質(zhì)吸收光譜�300�600nm均有吸收,呈逐漸下降的趨�(shì);溶血樣品中的血紅蛋白在350nm�400nm�540nm�580nm�4�(gè)吸收�;黃疸樣品中的膽紅素在300�500nm均有吸收,�400�500nm之間有強(qiáng)吸收�。由于脂血、溶血、黃疸樣品在較寬的波�(zhǎng)范圍�(nèi)有較�(qiáng)的吸收光譜存�,因而常常同�(cè)定波�(zhǎng)有重�,此時(shí)�(cè)得的吸光度包含待�(cè)物質(zhì)的吸光度和干擾物�(zhì)的吸光度,選用輔助波長(zhǎng)可消除干擾物�(zhì)的吸光度。在輔助波長(zhǎng)選擇�,根據(jù)�(cè)定波�(zhǎng)選擇輔助波長(zhǎng),要求干擾物質(zhì)在測(cè)定波�(zhǎng)同輔助波�(zhǎng)有相同的吸光�。例�:鉬酸銨法�(cè)定無(wú)�(jī)�,其測(cè)定波�(zhǎng)�340nm,�(duì)于溶血樣品,血紅蛋白在340nm有較�(qiáng)吸收,其吸光度�380nm處吸光度相同,選用380nm作輔助波�(zhǎng),�340nm�380nm兩波�(zhǎng)的吸光度之差�(cè)定無(wú)�(jī)�,可消除溶血�(duì)�(cè)定的干擾�
�、生化儀�(cè)定時(shí)間的選擇�
�(duì)于終�(diǎn)分析,�(cè)定時(shí)間的選擇�(yīng)充分考慮到干擾的�(wèn)�。例�:溴甲酚綠法測(cè)定白蛋白選用一�(diǎn)終點(diǎn)分析�,白蛋白同溴甲酚綠反應(yīng)�,在一分鐘�(nèi)基本上反�(yīng)完全,隨著反應(yīng)�(shí)間的延長(zhǎng),α 球蛋白同溴甲酚綠反應(yīng)形成干擾,因而溴甲酚綠法�(cè)定白蛋白,其測(cè)定時(shí)間應(yīng)定于1分鐘。對(duì)于速率分析�,一般用于酶活力的測(cè)�,而酶活力的大小是用反�(yīng)速度�(lái)表示 ,因而要求在零級(jí)反應(yīng)期內(nèi)�(cè)定反�(yīng)速率,此時(shí)的反�(yīng)速率不受底物濃度的影�,僅同酶活力大小有�(guān)。因�,�(cè)定時(shí)間應(yīng)選在零級(jí)反應(yīng)期內(nèi)。對(duì)于一種物�(zhì)的測(cè)�,由于選擇試劑和分析方法不�,其測(cè)定時(shí)間也隨之變化,因而對(duì)于特定的試劑和分析方�,�(yīng)先做出反�(yīng)�(jìn)程曲�,從曲線上選擇佳的�(cè)定時(shí)��
三、生化儀樣品量和試劑量的選擇�
�(duì)于不同的全自�(dòng)生化分析儀,其測(cè)定所需的反�(yīng)液總量不�。而試劑廠商給出了樣品量和試劑量的佳比�,根據(jù)比例同時(shí)縮小或增加用�,同時(shí)�(mǎn)足小的反�(yīng)液總量�
隨著全自�(dòng)生化分析儀的應(yīng)用的普及,�(duì)全自�(dòng)生化儀器的�(yīng)用越�(lái)越顯得重�,一般情況下,廠家在裝�(jī)后只�(jìn)行簡(jiǎn)單的�(yīng)用培�(xùn),或�,有時(shí)有些功能即使廠家在培�(xùn)�(shí)已經(jīng)講解�,�,我們的工作人員很難在極短的�(shí)間內(nèi)把廠家工程師所講解的大量的�(xué)�(xí)�(nèi)��