薄層色譜(TLC)是色譜技術的一�:將固定相涂布于玻璃板上或鋁板�,成一均勻薄層,樣品中各組分隨流動相在薄層中定向移�,不同組分和固定�/流動相的作用力不同而實�(xiàn)了分��
薄層色譜,分離后的物�(zhì)通過直接觀�,或者染色處理后觀�,或者在紫外燈照射下觀�。其中紫外照射熒光觀察是常用的方法�
但是薄層色譜法具有操作簡�、快�,設備投資小、檢測運行成本低等特�,在各領域得到廣泛應用�
1.測量方式:反射吸�、反射熒�;透射吸收、透射熒光
2.波長范圍�190-800nm;掃描速度:Max100mm/s
3.光源:氘�、鹵鎢燈、高壓汞燈(標準配置,自動轉(zhuǎn)換)
4.波長準確度:�(yōu)�1nm;波長重�(xiàn)性:�(yōu)�0.2nm
5.軟件:winCATS(Windows 2000/NT,32位操作系�(tǒng)�
1.波長范圍�、掃描速度快;
2.自動化程度高、操作簡��
3.單色器性能好;
4.軟件功能強大�
5.技��
薄層色譜掃描儀是對薄層色譜進行定量檢測分析的儀�,目前市場上有兩類薄層色譜掃描儀�
傳統(tǒng)薄層色譜掃描儀
是一種全波長掃描儀,提供波�200-800nm范圍的可選波�,通過檢測樣品對光的吸收強弱確定物�(zhì)含量。該掃描儀也能檢測254nm�365nm紫外照射�(chǎn)生的熒光強度,從而進行特異性檢測�
傳統(tǒng)掃描儀的掃描方式分為:單光束掃�、雙光束掃描和雙波長掃描�
單光束掃描:采用單一光束(即單一波長掃描�,其�(jié)果就是上圖中一特定波長條件下的單條曲線。儀器結(jié)構簡單,但是基線不穩(wěn),實際中很少使用�
雙光束掃描:采用同一波長的兩個光束同步掃�,一個光束掃描樣品展開通道,另一個光束掃描樣品通道旁邊的區(qū)�,這樣就可扣除吸收,部分消除薄層板展開方向鋪板不均勻產(chǎn)生的誤差。但是無法消除垂至于展開方向鋪板不均勻產(chǎn)生的誤差�
雙波長掃描:兩個不同波長的光束交替掃描樣品展開的通道區(qū)�,波長選擇時,一個波長為樣品大吸收位�,另一是吸收極小值位�。如上圖所�,如檢測目標�3(則大吸收峰�290nm,極小值可�200nm�260nm�325nm�。這種方法可基本消除鋪板不均產(chǎn)生的誤差,因此掃描基線很�(wěn)�� ?
以上各種掃描方式�,根�(jù)光源�?。⊕呙杈龋┎煌煞譃橹本€掃描和鋸齒掃描�
直線掃描:用可以覆蓋樣品展開通道的寬光束一次性掃完整個展開通道,即在展開方向上(圖中橫坐標),每個點的數(shù)�(jù)只是一個掃描數(shù)�(jù)��
鋸齒掃描:采用點狀光源,光點尺寸小于通道寬度,因此在展開方向移動到任何一點時,光源都要逐點沿樣品通道方向掃描,即形成“之”形(或鋸齒形掃描)。這樣,在展開方向上每一點的�(shù)�(jù)都是多個點掃描�(jié)果的累加�。鋸齒掃描的精度相對直線掃描明顯提高�
目前,在定量分析�,薄層掃描多采用雙波長鋸齒掃��
薄層分析的誤差包括三個方面:點樣誤差、展開誤�、定位誤差和檢測誤差�
采用自動點樣�,誤差可控制�0.5%,熟練的分析人員用毛細管點樣,誤差小�1.0%,若用微量進樣�,誤差會大一��
展開誤差來自鋪板的均勻性和樣品展開效果,若采用預制的高效薄層板,誤差會明顯降低,采用雙波長鋸齒掃描,也能有效降低展開誤��
定位誤差值斑點的位置和大小判�,擴�、脫尾等易產(chǎn)生定位誤�。檢測誤差來自光源的�(wěn)定�、光檢測器的�(wěn)定性以及樣品對光吸收(或熒光產(chǎn)生)的線性度等方�。為減少這些誤差,需要非常精密的機電系統(tǒng),這也直接導致�(chǎn)品高昂的價格�
通常情況下,薄層掃描分析的誤差在3%以下�
薄層�(shù)碼成像分析儀
薄層�(shù)碼成像分析技術是利用�(shù)碼成像設備獲得薄層板上各點的光強度信�,之后對獲得圖像進行分析的薄層分析技�。數(shù)碼成像設備包括兩種:照相機和掃描儀(由于數(shù)碼掃描儀采用逐行成像技�,為便于區(qū)分傳�(tǒng)薄層掃描儀的逐點掃描,將�(shù)碼掃描儀稱為逐行掃描儀��
和傳�(tǒng)薄層掃描一�,照相機或逐行掃描儀都具有光檢測系統(tǒng),它們都是將光量線性轉(zhuǎn)化為電信號的元件。不同的�,照相機和逐行掃描儀可進一步將電信號轉(zhuǎn)換成電腦圖像,圖像中單個點(像素)的顏色深淺反映了光的強弱�
因此,薄層數(shù)碼成像更接近人眼觀察檢�,結(jié)果更直觀,因此非常適合鑒�,特別是中藥指紋圖譜的識��
�(shù)碼成像儀不僅能完成普通白光照射下的成像分析,再裝�254nm�365nm紫外燈后,也可以檢測特異熒光,特異熒光檢��
根據(jù)�(shù)碼成像原�,薄層數(shù)碼成像從技術上可理解為單光源密集掃�。和傳統(tǒng)薄層掃描系統(tǒng)�?�,由于使用單一光源,效果不如雙波長掃描(即無法消除鋪板不均�(chǎn)生的影響�;而在掃描精度方面,卻要鋸齒掃��
在光源穩(wěn)定均勻性控制方面,照相機采用一次性閃�,不存在�(wěn)定性問題,但是照相機用點光源發(fā)散形成面光源照射到薄層板�,均勻性較難保證;逐行掃描儀采用線性光�,光源穩(wěn)定均勻性較傳統(tǒng)薄層掃描的光束要��
�(shù)碼成像分析以圖像顯示,對斑點正確選擇可消除定位誤差。因此在采用預制高效薄層板分析時,數(shù)碼成像分析可獲得與傳�(tǒng)薄層掃描儀同等的定量精度和準確��
在操作時間方�,照相機成像快,逐行掃描儀需�(shù)秒或者幾十秒,而傳�(tǒng)薄層掃描儀通常要幾分鐘�
�(shù)碼成像分析的不足在于只能使用白光�254nm�365nm�312nm等特定光�,而數(shù)碼成像的顯著�(yōu)勢是價格,比傳統(tǒng)薄層掃描儀低得��
CAMAG TLC SCANNER 3 薄層色譜掃描儀是卡瑪公司四十余年研制薄層色譜儀器的智慧�(jié)�,它有波長范圍寬、掃描速度�、自動化程度高及操作簡便等特點,是目前世界上的薄層色譜掃描儀�
·掃描速度快(�100mm/s�,強大的�(shù)�(jù)采集(達9600DPS)及�(shù)�(jù)傳輸�115200baud/s�,配合高精度� 量平臺(重現(xiàn)性X軸優(yōu)�100um,Y軸優(yōu)�50um�,保證掃描的準確度與重現(xiàn)性。采�20mm/s掃描速度� 每條軌道�80mm,有18條軌道的薄層板進行掃描,只需不到5分鐘就可完成包括計算和生成報告在�(nèi)的所有工��
·多一次能計算36條軌�,每條軌道多可檢�100種組��
·積分可采用自動或手動基線校正,自動或手動峰編輯�
·圖形外觀可方便地將物�(zhì)名稱與峰對應�
·可對薄層板上所有檢測到的峰進行自動光譜掃描�
·靈活設置的報告可打印包含從帶有物�(zhì)名稱�2維模擬曲線到復雜�3維圖在內(nèi)的彩色圖像�
·�(shù)�(jù)文件還包括固定相、色譜圖�(shù)�(jù)和圖像等所有信息�
·定量計算支持以下校正功能:單水平校正,使用內(nèi)標或外標的線性校�,非線性回歸的多水平校�,相� 標準 偏差(cv)統(tǒng)計等�
·副成分計算(包含在定量計算內(nèi))可用來按照歐洲或美國藥典規(guī)�,通過和主成分比較來定量未知峰�
·雙波長掃描:色譜由兩個選定的不同波長進行掃描,積分時測量波長掃描的信號減去參比波長掃描的信號,用 來扣除背景干�。雙波長掃描還可用于對未完全分離的峰進行定量�
·多波長掃描:色譜多可�31種不同波長掃�,允許多重計�,以達到�(yōu)化選�,定量計算時對每一片斷� 別選用佳波長的數(shù)�(jù)。winCATS的這一功能是薄層色譜中��
·儀器校驗:可對掃描儀的機�、光路及電子功能進行自動�(jiān)�,并能進行自動�(diào)�,糾正偏差。校驗功能還� 應用于自動點�、自動展開儀等所有可由winCATS控制的儀器�
·軌道�(yōu)化:可對每一色譜軌道進行多次掃描,每次掃描位置略微側(cè)�,自動計算軌道的高峰并用于定量,� 對歪曲的色譜進行正確計算�
·光譜掃描:可對所有軌�、所有斑點進行全光譜掃�,自動確認光譜位�,并組分鑒別及純度鑒定功�。光譜記錄范圍可自由地在190nm�800nm選擇� 燈從D2到W燈自動轉(zhuǎn)�� 光譜記錄速度�100nm/s,光譜采�40�/nm,確保光譜掃描快速準��
·光譜庫:卡瑪可提供常見藥物的光譜�,與用戶自己建立的薄層色譜光譜庫�(jié)合,對不同薄層板上的光譜記錄 進行比較�
·符合美國FDA 21 CFR part 11有關電子記錄和電子簽名等的規(guī)�,具有工作日�,記錄所有操作信�、儀�
運行狀況(包括點樣、展�、掃�、成像等步驟中所有可用winCATS控制的儀器)、數(shù)�(jù)變動��
1 薄層板制備:除另有規(guī)定外,將1份固定相�3份水在研缽中向一方向研磨混合,去除表面的泡后,倒入涂布器中,在玻璃板上平穩(wěn)地移動涂布器進行涂布(厚度為0.2�0.3mm),取下涂好薄層的玻璃板,置水平臺上于室溫下晾干,后�110℃烘30分鐘。即置有干燥劑的干燥箱中備用。使用前檢查其均勻度(可通過透射光和反射光檢視)�
2 點樣:除另有�(guī)定外,用點樣器點樣于薄層板上,一般為圓點,點樣基線距底邊2.0cm,點樣直徑為2—�4mm,點間距離約�1.5�2.0cm,點間距離可視斑點擴散情況以不影響檢出為�。點樣時必須注意勿損傷薄層表��
3 展開:展開室如需預先用展開劑飽和,可在室中加入足夠量的展開劑,并在壁上貼二條與室一樣高、寬的濾紙條,一端浸入展開劑�,密封室�?shù)纳w,使系統(tǒng)平衡或按正文�(guī)定操�。將點好樣品的薄層板放入展開室的展開劑中,浸入展開劑的深度為距薄層板底邊0.5�1.0cm(切勿將樣點浸入展開劑中�,密封室�,等展開至規(guī)定距離(一般為10�15cm�,取出薄層板,晾�,按各品種項下的�(guī)定檢測�
如需用薄層掃描儀對色譜斑點作掃描檢出,或直接在薄層上對色譜斑點作掃描定量,則可用薄層掃描�。薄層掃描的方法,除另有�(guī)定外,可根據(jù)各種薄層掃描儀的結(jié)構特點及使用說明,結(jié)合具體情況,選擇吸收法或熒光�,用雙波長或單波長掃�。由于影響薄層掃描結(jié)果的因素很多,故應在保證供試品的斑點在一定濃度范圍內(nèi)呈線性的情況�,將供試品與對照品在同一塊薄層上展開后掃�,進行比較并計算定�,以減少誤差。各種供試品,只有得到分離度和重�(xiàn)性好的薄層色譜,才能獲得滿意的結(jié)��
1 所用玻璃板應洗凈不掛水�,光滑平��
2 鋪板要均�,厚度適�,并于室溫下晾干后在110℃活�30分鐘,置� 有干燥劑的干燥箱或干燥器中備用�
3 點樣點一般為圓點,不能太��
維庫電子�,電子知�,一查百��
已收錄詞�153979�