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高效液相層析
閱讀�4642時間�2018-06-06 09:17:53

高效液相色譜也叫高壓液相色譜、高速液相色�、高分離度液相色譜等。是在經(jīng)典液相色譜法的基�(chǔ)上,�60年代后期引入了氣相色譜理論而迅速發(fā)展起來的。它與經(jīng)典液相色譜法的區(qū)別是填料顆粒小而均�,小顆粒具有高柱�,但會引起高阻力,需用高壓輸送流動相,故又稱高壓液相色譜。又因分析速度快而稱為高速液相色��

概述

  高效液相色譜(highperformanceliquidchromatography,HPLC)也叫高壓液相色譜(highpressureliquidchromatography�、高速液相色譜(highspeedliquidchromatography�、高分離度液相色譜(highresolutionliquidchromatography)等。是在經(jīng)典液相色譜法的基�(chǔ)上,�60年代后期引入了氣相色譜理論而迅速發(fā)展起來的。它與經(jīng)典液相色譜法的區(qū)別是填料顆粒小而均勻,小顆粒具有高柱效,但會引起高阻力,需用高壓輸送流動相,故又稱高壓液相色譜。又因分析速度快而稱為高速液相色��
  高效液相色譜是目前應(yīng)用最多的色譜分析方法,高效液相色譜系�(tǒng)由流動相儲液體瓶、輸液泵、�(jìn)樣器、色譜柱、檢測器和記錄器組成,其整體組成類似于氣相色�,但是針對其流動相為液體的特點作出很多調(diào)整。HPLC的輸液泵要求輸液量恒定平�(wěn);�(jìn)樣系�(tǒng)要求�(jìn)樣便利切換嚴(yán)密;由于液體流動相粘度遠(yuǎn)�(yuǎn)高于氣體,為了減低柱壓高效液相色譜的色譜柱一般比較粗,長度也�(yuǎn)小于氣相色譜�。HPLC�(yīng)用非常廣泛,幾乎遍及定量定性分析的各個領(lǐng)��
  使用高效液相色譜�,液體待檢測物被注入色譜�,通過壓力在固定相中移�,由于被測物種不同物�(zhì)與固定相的相互作用不�,不同的物質(zhì)順序離開色譜�,通過檢測器得到不同的峰信�,通過分析比對這些信號來判斷待�(cè)物所含有的物�(zhì)。高效液相色譜作為一種重要的分析方法,廣泛的�(yīng)用于化學(xué)和生化分析中。高效液相色譜從原理上與�(jīng)典的液相色譜沒有本質(zhì)的差�,它的特點是采用了高壓輸液泵、高靈敏度檢測器和高效微粒固定相,適于分析高沸點不易揮發(fā)、分子量�、不同極性的有機(jī)化合物�

特點

  用高壓輸液泵,壓�(qiáng)可達(dá)5000psi(相�(dāng)�34個標(biāo)�(zhǔn)大氣壓)。用直徑�3�10微米的超�(xì)支持物裝填均勻的不銹鋼柱。常用的支持物是在玻璃小珠上涂一�1�2微米的二氧化硅,�(jīng)硫酰氯反�(yīng)生成Si—Cl,�(jìn)一步連接疏水的烷�,如Si—C18H37,或陽離子交換基�(tuán)—Si(CH2)n—C6H4SO3H,或陰離子交換基�(tuán)—Si(CH2)nNH2。這種支持物能承受很高的壓�,化�(xué)性能�(wěn)�。用不同類型支持物的HPLC,可做吸附層�、離子交換層析和凝膠過濾層析。其分析微量化可�(dá)10-10克水平。但用于制備,可以純化上克的樣品。展層時間短,一般需幾分鐘到10余分�。其分析速度、精確度可與氣相層析媲美。HPLC適于分析分離不揮�(fā)和極性物�(zhì)。而氣相層析只適用于揮�(fā)性物�(zhì),兩者互為補(bǔ)充,都是目前最為理想的層析�。HPLC配有程序控制洗脫溶劑的梯度混合儀,數(shù)�(jù)處理的積分儀和記錄儀等電子系�(tǒng),成為一種先�(jìn)的分析儀�,在生物化學(xué)、化�(xué)、醫(yī)藥學(xué)和環(huán)境科�(xué)的研究中�(fā)揮了重要作用�

�(fā)展歷�

  1960年代,由于氣相色譜對高沸點有�(jī)物分析的局限�,為了分離蛋白質(zhì)、核酸等不易氣化的大分子物質(zhì),氣相色譜的理論和方法被重新引入�(jīng)典液相色��1960年代末科克蘭(Kirkland�、哈�、荷瓦斯(Horvath)、莆黑斯、里普斯克等人開�(fā)了世界上臺高效液相色譜儀,開啟了高效液相色譜的時�。高效液相色譜使用粒徑更�(xì)的固定相填充色譜�,提高色譜柱的塔板數(shù),以高壓�(qū)動流動相,使得經(jīng)典液相色譜需要數(shù)日乃至數(shù)月完成的分離工作得以在幾個小時甚至幾十分鐘內(nèi)完成�
  1971年科克蘭等人出版了《液相色譜的�(xiàn)代實踐》一�,標(biāo)志著高效液相色譜� (HPLC)正式建立。在此后的時間里,高效液相色譜成為最為常用的分離和檢測手段,在有�(jī)化學(xué)、生物化�(xué)、醫(yī)�(xué)、藥物開�(fā)與檢�、化�、食品科�(xué)、環(huán)境監(jiān)�、商檢和法檢等方面都有廣泛的�(yīng)用。高效液相色譜同時還極大的刺激了固定相材料、檢測技�(shù)、數(shù)�(jù)處理技�(shù)以及色譜理論的發(fā)��
  1960年代�,使用的填充粒大�100μm,提高柱效面臨著困境,后來的研究人員便采用微粒固定相來突破著一瓶頸??瓶颂m、荷瓦斯制備成功薄殼型固定相,這種在固定相在玻璃微球表面具有多孔薄殼,實現(xiàn)了高速傳�(zhì),為高效液相色譜技�(shù)的發(fā)展奠定了�(wěn)固的基礎(chǔ)。隨著填料粒徑的降低,更高的柱效也得以實�(xiàn)�1960年代研制出氣動放大泵、注射泵及低流量往�(fù)式柱塞泵,但后者的脈沖信號很大,難以滿足高效液相色譜的要求�1970年代,往�(fù)式雙柱塞恒流�,解決了這一問題�1970年代后科克蘭制備出全多孔球形硅膠,平均粒徑只�7μm,具有極好的柱效,并逐漸取代了無定形微粒硅膠。之后又制造出的鍵合固定相使柱的穩(wěn)定性大為提�,多次使用成為可��1970年后,適合分離生物大分子的填料又成為研究的熱��1980年后,改善分離的選擇性成為色譜工作者的主要問題,人們越來越�(rèn)識到改變流動相的組成事提高選擇性的�(guān)鍵�

維庫電子�,電子知識,一查百��

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