反相高效液相色譜是由非極性固定相和極性流動相所組成的液相色譜體�,它正好與由極性固定相和弱極性流動相所組成的液相色譜體系(正相色譜)相�。RP-HPLC的典型的固定相是十八烷基鍵合硅膠,典型的流動相是甲醇和乙腈。RP-HPLC是當今液相色譜的最主要的分離模�,幾乎可用于所有能溶于極性或弱極性溶劑中的有機物的分雀� 反相色譜法適于分離非極�、極性或離子型化合物,大部分的分析任�(wù)皆由反相色譜法完成�
反相高效液相色譜是由非極性固定相和極性流動相所組成的液相色譜體�,它正好與由極性固定相和弱極性流動相所組成的液相色譜體系(正相色譜)相�。RP-HPLC的典型的固定相是十八烷基鍵合硅膠,典型的流動相是甲醇和乙�。RP-HPLC是當今液相色譜的最主要的分離模�,幾乎可用于所有能溶于極性或弱極性溶劑中的有機物的分雀反相色譜法適于分離非極�、極性或離子型化合物,大部分的分析任�(wù)皆由反相色譜法完��
反相高效液相色譜是化學鍵合相色譜法的一�?;瘜W鍵合相色譜法是由液液色譜法發(fā)展起來的,是為了解決在分離過程�,機械吸附在載體上的固體液的流失問題而發(fā)展出來的一種新方法。鍵合相色譜法通過將不同的有機官能團通過化學反應(yīng)共價鍵合到硅膠載體表面的游離�(jīng)基上,而生成化學鍵合固定相,化學鍵合固定相對各種極性溶�
都有良好的化學穩(wěn)定性和熱穩(wěn)定�。由它制備的色譜主柱效高、使用壽命長、重�(xiàn)性好,幾乎對各種類型的有機化合物都呈現(xiàn)良好的選擇�,并可用于梯度洗脫操作,消除了分配色譜法的缺��
根據(jù)鍵合固定相和流動相相對極性的強弱,可將鍵合色譜法分為正相鍵合色譜法和反相鍵合色譜法.反相鍵合色譜法即反相高效液相色譜.在正相鍵合色譜法�,鍵合固定相的極性大于流動相的極�,適用于分離油溶性或水溶性的極性和強極性化合物.在反相鍵合相色譜法中,鍵合固定相的極性小于流動相的極性適用于分離非極性、極性或離子型化合物,其應(yīng)用范圍也比正相鍵合相色譜法更廣泛�
在反相鍵合相色譜法中使用的是非極性鍵合固定相。它是將全多�(或薄�)微粒硅膠載體,�(jīng)酸活化處理后與含輕基�(c4、C8、C18)或苯基的硅烷化試劑反�(yīng),生成表面具有烷基或苯基的非極性固定相。如共價�(jié)合到載體上的直鏈碳氫化合物正辛基等。關(guān)于反相色譜的分離機理,吸附色譜的作用機制認為溶�(zhì)在固定相上的保留主要是疏水作�,在高效液相色譜中又被稱為疏溶劑作�。根�(jù)疏溶劑理�,當溶�(zhì)分子進入極性流動相�,即占�(jù)流動相中相應(yīng)的空�,而排擠一部分溶劑分子。當溶質(zhì)分子被流動相推動與固定相接觸�,溶質(zhì)分子的非極性部分或非極性因子會將非極性固定相上附著的溶劑膜排擠開,而直接與非極性固定相上的烷基官能團相�(jié)�(吸附)形成締合�(luò)合物,�(gòu)成單分子吸附�。這種疏溶劑的吸附作用是可逆的,當流動相極性減少時,這種疏溶劑斥力下�,會發(fā)生解�,并將溶質(zhì)分子解放而被洗脫下來�
工業(yè)生產(chǎn)中的�(yīng)�
隨著技�(shù)的不斷改�,反相高效液相色譜法獲得日益廣泛的�(yīng)�,在高效液相色譜法中也占有重要的地�。自冬梅等人提出了一種利用反相高效液相色譜法分析米根霉乳酸發(fā)酵液中有機酸的方�。應(yīng)用反相認值kosil一11SC18RS色譜�,�0.olmol/L磷酸P(H2.5)作為流動�,�(fā)酵液�(jīng)稀硫酸�(yù)處理后直接進樣分離定量,�10mni�(nèi)把其中的乳酸、蘋果酸、富馬酸等完全分離定�,各種酸回收率大于97%�
其實驗結(jié)果證�,該方法能將米根霉乳酸�(fā)酵液中乳酸、蘋果酸和富馬酸完全分離并準確定�。本方法具有前處理簡單、干擾小、靈敏度�、分析速度快等�(yōu)�,對于及時測定乳酸�(fā)酵過程的變化具有重要意義,是測定乳酸發(fā)酵液中各有機酸的快速、有效的定量測定方法�
藥代動力學中的應(yīng)�
高效液相色譜在藥物代謝動力學上的研究主要是為藥物代謝動力學軟件提供數(shù)�(jù),并最終通過藥代動力學軟件處理得到藥物動力學�(jié)果。其中動力學參數(shù)主要集中�:吸收半衰�(tl/2�)、消除半衰期(t1126)、達峰時(tma)、血藥濃�(Cmax)、曲線下面積AUC、消除率CIB、表觀分布容積Vd�。通過這些動力學參�(shù)對藥物代謝動力學進行研究,并通過這種方法對藥物對機體的作用情況進行比較,有利的指�(dǎo)藥物的開�(fā)和研�,在這個方向的研究可能是高效液相色譜與藥代動力學軟件聯(lián)用分析的�(fā)展方向�
烷基鍵合固定相對每種溶質(zhì)分子締合作用和解締作用能力之�,就決定了溶質(zhì)分子在色譜過程的保留�。以下簡述影響溶�(zhì)保留值的三個因�:
1)溶�(zhì)分子�(jié)�(gòu)
在反相鍵合相色譜法中,溶質(zhì)的分離是以它們的疏水�(jié)�(gòu)差異為依�(jù)�,溶質(zhì)的極性越�,疏水性也�,保留值越大。根�(jù)疏溶劑理�,溶質(zhì)的保留值與其分子中非極性部分的總表面積有關(guān),其與烷基鍵合固定相結(jié)出的面積愈人,保留值越��
2)烷基鍵合固定相的特�
烷基鍵合固定相的作用在于提供非極性作用表�,因此鍵合到硅膠表面的烷基�(shù)量就決定著溶�(zhì)容量因子的大小。烷基的疏水特性隨碳鏈的加長而增�,溶質(zhì)的保留值也隨著烷基碳鏈長度的增加而增�。隨著烷基碳鏈的增長,增加了鍵合相的非極性作用的表面�,其不僅影響溶�(zhì)的保留�,還影響色譜柱的選擇�,即隨烷基碳鏈的加長其對溶�(zhì)分離的選擇性也增大�
3)流動相性質(zhì)
流動相的表面張力愈大,介電常數(shù)愈大,其極性越�,此時溶質(zhì)與烷基鍵合相得締合能力越�,流動相的洗脫強度�,�(dǎo)致溶�(zhì)的保留值越��